相思子毒素的结构:
(1)、相思子毒素的一级结构:
相思子毒素是一种分子质量约为63ku~67ku的糖蛋白,分子由A、B两条多肽链通过1个二硫键连接而成。完整毒素在SDS-PAGE分析时呈一条蛋白带,经二巯基乙醇处理后,A、B两条链分离开,其中A链呈酸性,分子质量约为30ku,与蓖麻毒素A链存在102个相同的氨基酸残基;B链呈中性,分子质量约35ku。有关试验表明,相思子毒素两条链经二巯基乙醇还原分离开后,其活性并不丧失。
与蓖麻毒素相似,相思子毒素也是以前体蛋白形式表达,编码前体相思子毒素的基因组不含内含子,从5′端到3′端分别编码由34个氨基酸残基组成的前导序列,250个或251个氨基酸残基组成的A链,10个氨基酸残基组成的连接肽,267个或268个氨基酸残基组成的B链。34个氨基酸残基组成的前导序列很可能包含一个信号肽,诱导前体进入内质网,进行翻译后加工,然后再转运到种子蛋白储存部位,推测信号序列的切点位于第19位的Se
羧基端。
相思子毒素所含的糖基主要存在于B链上,糖的类型为甘露糖和N-乙酰葡萄糖胺,毒素经糖基修饰后,可以增加其自身结构的稳定性,防止降解,增强对极端条件的适应性。已阐明了Ab
-a的B链的2个糖基化位点附近的氨基酸序列及糖链结构,糖肽附近的氨基酸顺序为Asp-As
(CHO)-Gly-Th
,Gly-As
(CHO)-As
,其序列分别类似于Rici
-D的B链Asp94-As
(CHO)-Gly-Th
97,Th
134–As
(CHO)-As
136。
(2)、相思子毒素的高级结构:
晶体结构研究表明,相思子毒素A链分为3个折叠区域。ab
-a的A链C末端比蓖麻毒素少4个氨基酸残基。关于ab
-a及蓖麻毒素的A链折叠上的差异都有可能影响对核糖体的识别和结合。相思子毒素a的B链的整个折叠方式与蓖麻毒素相似,但它们的N末端氨基酸残基第1位~12位及几个突环(第39~45,100~106,109~118,133~139,166~170,193~204位氨基酸残基)有较大差异。Ab
-a的B链由2个区域组成,每个区域又包含4个亚区λ,α,β,γ,每一区域的主体结构是由α,β,γ组成,亚区2λ连接B链的2个区域,亚区1λ参与A,B链之间二硫键的形成,2个λ亚区间有同源性,但与其他亚区有区别,2个亚区的α,β,γ间均有同源性。除了1λ亚区,ab
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